همسانه سازی و بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتری e. coli

زمینه و هدف: سیاه­زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل این بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس می­باشد. آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس برای درمان و واکسن قابل استفاده می باشد. هدف این مطالعه بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتریe. coli می­باشد.  مواد و روش ها:  قطعات ژنی مورد نظر از پلاسمید pxoi  تکثیر و  با عمل soeiong pcr  قطعه بدست آمده در کلونینگ وکتور همسانه­سازی گردید و بعد از جداسازی به وکتور pet28a(+)  زیرهمسانه­سازی و به باکتری e.coli سویه bl21(de3) تراریخت شد. بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس تحت القایiptg انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی­ژن حاصل در چهار نوبت به موش­های سوری تزریق شد. آنتی­بادی پلی­کلونال تولید شده در سرم موش­ها اندازه­گیری گردید. یافته ها: آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله­ی pcr،  آنالیز آنزیمی  و توالی یابی تأیید گردید. پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکه­گذاری وسترن تایید شد. سرم از خون موش جداسازی شد و تیتر آنتی بادی علیه pa تغییر یافته از طریق الایزای غیر مستقیم ارزیابی گردید. نتیجه گیری: پروتئین تولیدی دارای خاصیت مهار کنندگی بالایی برای فاکتورهای بیماریزای lf و ef می باشد. با توجه به شناسایی آنتی ژن pa بوسیله آنتی بادی آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس، می­توان به­صورت مجزا، یا ترکیبی با سایر دومن های pa در طراحی واکسن و بعنوان دارو برای درمان و پیشگیری بیماری سیاه­زخم استفاده نمود.